这次要弄个BL、CP6、DNA、EP、PCR、PW、RNA和TB相关的无内毒素质粒大提全流程速查手册，我就把所有步骤都给捋顺了。 先把东西给备齐。把那个超微量分光光度计调零，保证浓度读数准点儿。离心机要稳定，转速在8000 rpm左右。移液器要准备50到100微升还有100到1000微升的，吸头盒多备几个。试剂盒就选天根无内毒素质粒大提试剂盒，离心柱型的。再备点异丙醇用来沉淀DNA。50毫升的离心管都提前标好号，免得混了。 操作步骤总共12步，稳拿高纯度质粒。第一步是柱平衡，千万别省这个过程。把平衡液BL给CP6吸附柱加进去2.5毫升，8000 rpm转2分钟。废液倒掉之后赶紧用柱子，放久了结合能力会变差。 第二步是菌液处理。把过夜培养的菌液分批倒进过滤杯里，每批别超过15毫升。要是离心机转子角度大，单次别超过10毫升，免得漏出来。然后加0.7倍体积的异丙醇进去混一下，转进吸附柱里。 第三步是离心收集。室温下8000 rpm转2分钟废液倒掉，柱子套回去。因为滤液可能会少一点，所以要分两次过柱，每次都按刚才的条件来。 第四步是漂洗Ⅰ。往吸附柱里加10毫升漂洗液PW（这时候里面已经加过无水乙醇了），8000 rpm转2分钟废液倒了套回去。 第五步是漂洗Ⅱ。再重复一次漂洗Ⅰ的步骤，两次漂洗能把盐离子和蛋白洗干净。 第六步是高浓度乙醇洗涤。往柱子里加3毫升无水乙醇（这回可是真正的无水乙醇），8000 rpm转2分钟废液倒掉套回去。 第七步是离心甩干。再8000 rpm转5分钟甩干水分，开盖放一会儿让乙醇挥发干净。 第八步是洗脱。把柱子放到干净的50毫升收集管里中间悬空滴1到2毫升TB洗脱缓冲液（注意pH值要在7.5到8.0之间）。室温静置5分钟后8000 rpm转2分钟收集到EP管里放冰箱保存。 总结一下：给平衡液现用现加别放久了；异丙醇宁少勿多别带RNA；两次漂洗加高浓度乙醇甩干能把盐离子、蛋白和乙醇都去除干净，这样后续做酶切或者PCR就不会受干扰了。按这套流程操作下来，质粒浓度肯定在5微克每毫升以上、A260/A280比值也在1.8以上，这就不是碰运气的事儿了。