Cy3 CTB 是由 Cyanine3 花菁染料跟霍乱毒素B亚基（CTB）共价连在一块儿的荧光探针。CTB 能紧紧抓住细胞膜表面的GM1神经节苷脂（Kd ≈ 10⁻¹⁰ M），而 Cy3 发出来的光特别亮，所以它被当成神经科学和细胞生物学里用来追踪神经元还有标记脂筏的老法宝。其实它就是一种橙红色的荧光标记蛋白。CTB 本身是五聚体蛋白（约55 kDa），没毒，但能找准GM1受体；Cy3 是老牌花菁染料，吸光大概在550 nm，发光约在570 nm。这俩通常是用NHS酯偶联法连起来的，活性酯基团会和CTB上的赖氨酸残基反应，形成稳定的键。为了让亮度和活性平衡好，一般每个CTB五聚体连2-4个Cy3分子。它发出来的光是橙红色（Ex: ~550 nm, Em: ~570 nm），跟绿色染料（比如FITC）还有蓝色染料（比如DAPI）容易分开，特别适合做多色成像。它的亮度超高，摩尔消光系数大，就算GM1表达得少也能看清信号。光也不容易被漂白掉，做长时间动态成像挺合适。五聚体结构让它的亲和力特强，背景信号低。它本身没毒，修饰之后也安全。 通常大家首选它来做常规神经元示踪，或者用来看细胞膜上的微区怎么动。要是跟Alexa Fluor 555 CTB比起来，AF555更耐光、更容易溶水，要是想长时间拍或者背景要求严，就选AF555；要是平时用，Cy3性价比更高。跟远红染料比如Cy5比起来，它虽然信号穿透力不如远红的那么强，但更亮些，跟大多数显微镜的标准通道刚好配得上。Cy3怕光，实验全程要避光存，-20℃避光就行别老冻融。浓度别太高了容易瞎粘或者结块，建议多试几个浓度（通常0.1-1 μg/mL）。GM1在很多细胞都有表达，如果只想标特定的细胞类型，可以用含BSA的缓冲液把背景挡住。多色实验的时候得小心跟绿色染料串色（Bleed-through），最好先做个单染看看滤光片设得对不对。 还会用到很多相关的东西：像DBCO-PEG5-GGG-AmineBODIPY、Alexa Fluor 430 N-hydroxysuccinimide ester、Fluorescein-PEG3-AmineDusQ 2 dT phosphoramidite这些。还有像AF555、Alexa、AmineBODIPY、AmineDusQ、BODIPY、BSA、Biotin、CTB、Cholera这些词也都在用。此外还有Texas Red-X NHS ester、5-FAM DBCO、Concanavalin A-FITC、Cyanine7 phosphoramidite、VIC azide、6-isomer、FITC conjugated GelMA这些试剂也能跟它配合着用。 另外还有Ovalbumin,Cyanine5 labeled、Ovalbumin,Cyanine5.5 labeled、Ovalbumin,Cyanine7 labeled、Ovalbumin,HRP labeled、Ovalbumin,Biotin labeled、Ovalbumin,Rhodamine labeled这些标记的卵清蛋白也常出现。 （本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理）