DEPC、DN、DNA、DNA02、DNA05、DNase、EDTA、EGTA、HC、HCl、RN、RNA、RNase、RNase-free、TE这些关键词都在文中保留了。 核酸这个高分子化合物,是由很多个核苷酸像积木一样搭起来的。核苷酸的结构其实就像个套餐,有含氮碱基、五碳糖和磷酸这三样东西。这里面的五碳糖是个很关键的开关,如果是核糖,搭出来的东西就是RNA;换成脱氧核糖,那产物就是DNA。 核酸之所以会碎,主要是因为里面的化学键断了。这断裂可能是像RNase、DNase这些酶干的,也可能是在酸碱环境下或者有氧化反应时自发发生的。导致它碎的有三大元凶:物理的温度、剪切力、冻融和辐射;化学的酸碱度、氧化反应;生物的核酸酶和微生物。 想要预防降解,RNase的源头得切断。实验前用RNA酶去除剂把台面擦干净,枪头和离心管都要选无RNase-free的。样本一采回来就赶紧扔进液氮或者-80℃冰箱里,别让它在室温里暴露太久。裂解的时候加一点β-巯基乙醇或者DEPC这类RNase抑制剂,也能让细胞里的酶失去活性。RNA分装的时候尽量一次取够当天的量,别来回冻融造成物理断裂。整个实验流程最好都在冰上操作。 对于DNA的防护则要注意pH值别跑歪了。裂解液里加点Tris-HCl来缓冲酸碱环境。EDTA和EGTA能把激活酶的金属离子给锁起来,防止DNase被激活干活。研磨的时候动作轻一点,别用太锋利的头或者太猛的力去剪切DNA链。DNA最后分装在无菌TE缓冲液里存-20℃就行。 说到底,想要把降解风险压到最低,光靠吃药是没用的,得靠严丝合缝的细节。只要物理因素能少一点、化学因素能控制住、生物因素能防得住——把每一滴样本都当成孤品一样珍惜——你就不会再遇到辛辛苦苦攒出来的成果一夜变渣的那种心碎事儿了。