咱们现在手上有一套蔗糖合成酶(合成方向;SS-Ⅱ)试剂盒,用的是分光光度法,一次能测24个样,里头装着50管试剂。在用它正式干活之前,建议先挑两个到三个差别比较大的样品拿出来预测试一下,这样能更准地知道它有没有效果。大家知道蔗糖主要是从叶片这样的源器官运输到库器官的。咱们手里测的这个酶叫蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13),它挺神奇的,既能把游离的果糖和葡萄糖供体UDPG合在一起生成蔗糖,也能反过来把蔗糖给分解了。因为它是蔗糖代谢里的关键角色,所以咱们重点关注它合成方向的那个SS-Ⅱ活性。 这套试剂盒的工作原理其实很简单:让SS-Ⅱ去催化果糖和UDPG反应生成蔗糖,然后这个新生成的蔗糖又能跟间苯二酚发生颜色变化。咱们就在480nm波长下看它吸不吸光,吸得越厉害说明酶活性越强。做实验的时候你得自己准备分光光度计、水浴锅、离心机、移液器还有1毫升的玻璃比色皿这些家伙事儿。如果搞不到这些仪器也别着急,稍微琢磨琢磨就能想到替代的办法。 先来聊聊怎么保存这些试剂。对于常规的液态试剂像酶工作液和显色剂,最好放在2到8摄氏度的冰箱里,千万别贴着制冷口那边放,那样容易结冰。高活性的东西像酶制剂或者标准品母液得放在零下20摄氏度的冷冻室里。对于那些稀有酶或者荧光标记物这种敏感货,得存到零下80摄氏度的超低温冰箱里才行。干粉试剂和稀释液就随便放在15到25摄氏度的室温里就行,也不要离暖气太近。还有个特别重要的事儿,像酶、荧光探针这些怕光的东西一定要用棕色瓶子或者避光袋装起来,不能让阳光直照。 为了防止东西受潮变质,干粉试剂最好放在湿度不超过60%的干燥柜子里再放点干燥剂。试剂开封之后记得赶紧盖严实盖子,防止被氧化或者长细菌;不同牌子的试剂别混着放一块儿,免得串味互相污染了。标准品和质控品要跟核心试剂一样存着;配套的包被板也得密封好放进冰箱冷藏,不然涂层掉了就没法用了。 到了看结果这一步也得动动脑筋。先算一算标准品和样本复孔的平均信号值(通常是OD值或者荧光强度),把那些偏差超过10%的异常值都给剔除掉。再用这个平均值减掉空白对照的平均值,就得到了校正后的信号值。接着拿标准品的浓度做横坐标,校正后的信号值做纵坐标画一条线去拟合线性回归方程Y=aX+b。如果相关系数R²小于0.99就说明数据不够稳当,得重新做一遍才行。 最后算出样本的结果要看是哪一类:如果是测浓度的代谢物或者离子就按常规方法算;如果是测酶活性的话也要照着生化试剂盒的说明书来操作。 不过大家要注意一点:这产品可只能用来做科研实验用哈!