你要是问 CF568 和 CF594 标记的人血清白蛋白（HSA）为啥能搞出来这么亮的荧光信号，这事儿得从它们的分子结构说起。这两个家伙都把 CF 染料分子通过共价键挂在了 HSA 上，只不过一个是 CF568，另一个是 CF594。不管是 CF568 HSA 还是 CF594 HSA，它们的化学本质都是大分子的人血清白蛋白，分子量大概在 66.5 kDa，上面排满了 585 个氨基酸。其中，蛋白链上有 35 个半胱氨酸（Cys）残基，这些残基要么自己配对形成二硫键，要么留着个自由的巯基。另外还有很多赖氨酸（Lys）残基，这才是染料连上去的关键。 染色剂是靠亲核取代反应给挂上的。先把 CF568 或者 CF594 的 NHS 酯基团活化了，HSA 分子表面那些带着氨基（-NH₂）的赖氨酸残基就会过来亲核进攻，去抢 NHS 酯里的羰基碳原子。反应完了以后，就能生成稳定的酰胺键（-CO-NH-），同时把 N-羟基琥珀酰亚胺给释放出去。这样一来，荧光染料就稳稳地长在了 HSA 上了。 我们通常给 HSA 上的每个分子都挂上多个染料分子，这样信号就会更强。不过要是标记得太多了，也可能会把蛋白的结构搞乱，影响它的活性。CF568 HSA 发出的光是橙红色的，激发波长大概在 562 nm，发射波长在 583 nm，这和 Alexa Fluor 555 的光谱挺像的，信号很亮，就是偶尔会和绿色通道（比如 FITC）有点重叠。 CF594 HSA 发的光是深红色的，激发波长在 593 nm，发射波长在 614 nm。它往远处看了看光谱，发现自己的发射峰和绿色通道、远红通道（比如 Cy5）都隔开了一段距离，非常适合做多色实验。这东西的消光系数很高，水溶性也好，比 Alexa Fluor 594 还亮。 这两个试剂的主要应用场景差不多，都能做流式细胞术和免疫荧光实验。它们特别适合常规荧光显微镜的 561 nm 激光通道。CF594 在超高重多色流式实验中表现突出，可以作为独立的红色通道来解决串色的问题。要是你想做 FRET 研究，也可以用 CF568 做供体、CF594 做受体。 除了这两个试剂本身，实验室里还常备着一堆相关的化学货：比如 DBCO-PEG5-GGG-AmineNH2-PEG36-NH2NH2-PEG48-NH2NH2-PEG60-NH2NH2-PEG100-NH2Amine-PEG4-AmineAmine-PEG8-AmineAmine-PEG12-AmineAmine-PEG24-AmineAmine-PEG36-AmineAF-353 hydrochloride，还有 Sulfo-Cy7-PEG-NHSTAMRA carboxylic acid、Methyltetrazine-PEG4-maleimide、Alexa Fluor 430 N-hydroxysuccinimide ester 这些东西。